Ταχεία εξέταση αδενοϊού-Ρινική έκκριση

Προβλεπόμενη χρήση:

Το κιτ δοκιμής νουκλεϊκού οξέος SARS-CoV-2 εφαρμόζεται για την ποιοτική ανίχνευση νουκλεϊκού οξέος του COVID-19 σε ρινοφαρυγγικά επιχρίσματα, στοματοφαρυγγικά επιχρίσματα και πτύελα. Τα αποτελέσματα των δοκιμών παρέχουν βάση μοριακής διάγνωσης για λοίμωξη ή ύποπτους ασθενείς και δεν πρέπει να χρησιμοποιούνται ως το μοναδικό κριτήριο για την κλινική διάγνωση.

Υλικά:

ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΕΞΕΤΑΣΗΣ:

Α. Προετοιμασία δείγματος

Το εξαγόμενο RNA είναι η πρώτη ύλη για το κιτ δοκιμής νουκλεϊκού οξέος SARS-CoV-2.

Σημαντικό: Κάθε διαδικασία εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος πρέπει να εκτελείται ταυτόχρονα με έναν θετικό μάρτυρα (40 μL, αραιωμένο με στείρα αλατούχα διαλύματα/PBS στον επιθυμητό όγκο) και έναν αρνητικό έλεγχο (40 μL, αραιωμένο με στείρα αλατούχα διαλύματα/PBS στον επιθυμητό όγκο).

Συνιστάται η χρήση των ακόλουθων κιτ εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος του εμπορίου: Mini Kit PureLinkTM Viral RNA/DNA (Invitrogen); Viral RNA Mini kit (QIAGEN); Κιτ Hi-DNA/RNA TIANamp (TIANGEN);

Β. Ρύθμιση μίγματος αντίδρασης

1. Όλα τα αντιδραστήρια και τα δείγματα θα πρέπει να αποψυχθούν πλήρως, να αναμειχθούν πλήρως και να φυγοκεντρηθούν για λίγο σε θερμοκρασία δωματίου (κατά προσέγγιση εύρος 18 έως 25 βαθμούς ) πριν από τη χρήση.

2. Προετοιμάστε τον απαιτούμενο όγκο του μίγματος αντίδρασης σε σωλήνα μικροφυγοκέντρου πολυπροπυλενίου κατάλληλου μεγέθους.

3. Μεταφέρετε με σιφώνιο 25 µL του μείγματος αντίδρασης σε κάθε απαιτούμενο φρεάτιο μιας κατάλληλης πλάκας αντίδρασης οπτικού 96-πηγαδιού ή ενός κατάλληλου σωλήνα οπτικής αντίδρασης.

Γ. Προσθήκη προτύπου

1. Προσθέστε 5 μL εξαγόμενου RNA από δείγματα/Θετικό μάρτυρα/Αρνητικό μάρτυρα. Ο συνολικός όγκος είναι 30 μL.

2. Αναμίξτε καλά τα δείγματα και τους μάρτυρες με το μίγμα αντίδρασης με πιπέτα πάνω και κάτω/δίνη.

3. Κλείστε την πλάκα αντίδρασης 96-πηγαδιού με κατάλληλα καπάκια ή οπτική αυτοκόλλητη μεμβράνη και τους σωλήνες αντίδρασης με τα κατάλληλα καπάκια.

4. Φυγοκεντρήστε την πλάκα αντίδρασης 96-πηγαδιού σε φυγόκεντρο με ρότορα πλάκας μικροτιτλοδότησης για 30 δευτερόλεπτα σε περίπου 2500 rpm.

Δ. Προγραμματισμός του οργάνου PCR σε πραγματικό χρόνο

Για βασικές πληροφορίες σχετικά με τη ρύθμιση και τον προγραμματισμό των διαφόρων οργάνων PCR πραγματικού χρόνου, ανατρέξτε στο εγχειρίδιο χρήσης του αντίστοιχου οργάνου. Η ανάλυση έχει βελτιστοποιηθεί για το σύστημα PCR πραγματικού χρόνου ABI7500. Η εκτέλεση της PCR πραγματοποιείται με συνθήκες κύκλου όπως περιγράφεται στον παρακάτω πίνακα.

Ορίστε τους ανιχνευτές φθορισμού

*Ρυθμίστε την εσωτερική αναφορά φθορισμού του οργάνου σε "Καμία", για παράδειγμα: Για όργανα της σειράς ABI ρυθμίστε την "Passive Reference" σε "None".

Ε. Ανάλυση δεδομένων

Ρυθμίστε τις παραμέτρους ανάλυσης και αναλύστε τα δεδομένα σύμφωνα με τις οδηγίες λειτουργίας των σχετικών οργάνων.

Πάρτε για παράδειγμα το ABI 7500:

Η γραμμή βάσης πρέπει να οριστεί σε ένα εύρος που εξαλείφει τον φθορισμό φόντου που εντοπίζεται στους πρώιμους κύκλους ενίσχυσης, αλλά δεν επικαλύπτει την περιοχή όπου τα σήματα ενισχύσεων ανεβαίνουν πάνω από το φόντο (Τιμή έναρξης:3~10; Τιμή λήξης: {{2} }). Το κατώφλι κύκλου (Ct) πρέπει να βρίσκεται στη βάση της εκθετικής φάσης. Κάντε κλικ στην επιλογή "Ανάλυση" για να λάβετε αυτόματα το αποτέλεσμα της ανάλυσης και διαβάστε το αποτέλεσμα ανίχνευσης στο παράθυρο "Αναφορά".

Δημοφιλείς Ετικέτες: αδενοϊός ταχεία δοκιμή-ρινική έκκριση, Κίνα, προμηθευτές, κατασκευαστές, εργοστάσιο, χύμα